北京体彩网

北京体彩网 今天是2020年1月14日 星期二,欢迎光临本站 

相关文献

Novel Role of FBXW7 Circular RNA in Repressing Glioma Tumorigenesis

文字:[大][中][小] 2018/11/8     浏览次数:    

Novel Role of FBXW7 Circular RNA in Repressing Glioma Tumorigenesis

FBXW7环状RNA在抑制胶质瘤肿瘤发生中的新作用

 

    期刊:J. Natl. Cancer Inst.;影响因子:11.238

    发表单位:中山大学附属第一医院

 


导 读

 

    circRNA翻译蛋白质,并抑制肿瘤进展。

 


摘 要

 

    circ-FBXW7在正常人脑中大量表达。circ-FBXW7编码一种新的21kDa蛋白质:FBXW7-185aaFBXW7-185aa在癌细胞中的上调抑制了增殖和细胞周期加速,而FBXW7-185aa的敲低在体外和体内促进了恶性表型。FBXW7-185aa通过拮抗USP28诱导的c-Myc稳定化来降低c-Myc的半衰期。

 


背景介绍

 

    环状RNAcircRNA)是在真核基因组中广泛存在的RNA转录物。最近的证据表明,circRNA在组织发育,基因调控和癌发生中起重要作用。然而,尽管最近报道了几种circRNA的翻译,但是circRNA是否编码功能性蛋白仍然是难以捉摸的。

 


结 果


1   人胶质母细胞瘤及相邻正常组织中不同的circRNA表达模式

    我们对来自10对临床胶质母细胞瘤组织及其癌旁组织混样成1个肿瘤组织、1个癌旁组织,进行了circRNA-seq分析,然后进行find_circ鉴定circRNAs,并与circBase数据库比对。我们接下来使用RefSeq数据库注释这些已识别的候选者。鉴定的circRNA的染色体分布在癌组和正常组之间没有显著差异,而癌组中circRNA的总表达被下调。我们专注于在癌组和正常组之间具有最大差异表达的候选物,并将它们与circRNADb匹配。在这些特异性候选物中,由FBXW7基因的外显子3和外显子4的环化形成的novel_circ_022705引起了我们的注意。

 


2   circ-FBXW7鉴定为环状RNA

    设计收敛和发散引物,其特异性扩增FBXW7的经典或反向拼接形式,验证了FBXW7基因的外显子34形成内源性circRNA。接下来,使用Sanger测序确认circ-FBXW7连接。我们发现反向拼接形成620 nt circ-FBXW7而不是Circbase中报道的1227 nt circ-FBXW7,很可能是由于内含子序列剪切。合成的circRNA表达载体成功过表达circ-FBXW7,由剪接受体(SA)和供体(SD)的侧翼重复序列诱导,对于缺乏下游侧翼序列的对照载体未观察到。利用FISH分析进行circ-FBXW7细胞定位,不同细胞组分q-PCR分析证实circ-FBXW7主要位于细胞质中(注意:此处发现该circ与circbase的不一致,测序得到的circ长度与circbase不一致时,要好好实验确认,circbase的结果是软件导出的,未经实验验证的)

 


3   Circ-FBXW7编码能力评估

    在circ-FBXW7中存在潜在的跨越连接ORF5'-帽独立翻译需要内部核糖体进入位点(IRES)。使用双荧光素酶载体系统验证了circ-FBXW7中潜在的IRES活性,表明circ-FBXW7 IRES可以诱导5'-帽独立翻译。随后建立一组载体以确认circ-FBXW7可在人体细胞中翻译,并在阳性对照中添加FLAG标签。FLAG标签抗体仅在circ-FBXW7-FLAG-FBXW7-FLAG-转染的细胞中检测到约22kDa蛋白质,表明circ-FBXW7-FLAG载体被翻译。然后使用液相色谱串联质谱仪进一步表明该新蛋白(FBXW7-185aa)由circ-FBXW7编码。

 


4   FBXW7-185aa对胶质瘤细胞的作用及其分子机制

    建立稳定的circ-FBXW7过表达U251U373细胞,其中IRES序列突变但载体可以与circ-FBXW7形成相似的circRNAIRES突变载体用作阴性对照。与其对照细胞相比,稳定过表达U251U373细胞的Circ-FBXW7FBXW7-FLAG表现出大量G1期阻滞,并且存活率降低。特异性shRNA敲低circ-FBXW7降低了FBXW7-185aa的表达,增加了细胞周期加速和细胞活力。表明FBXW7-185aa,但不是circ-FBXW7,可诱导细胞周期停滞并减少胶质瘤细胞的增殖

    我们发现c-Myc的表达在circ-FBXW7-FBXW7-185aa-过表达细胞中也降低,半衰期测试表明FBXW7-185aa可以使c-Myc去稳定化。体内和体外泛素化测定显示FBXW7-185aa过表达拮抗USP28诱导的c-Myc的去泛素化和增加的c-Myc遍在蛋白化。然而在Hs683SW1783细胞中,如果FBXW7α被敲低,FBXW7-185aa的过表达不能降低c-Myc,表明FBXW7-185aa通过FBXW7α调节c-Myc表明FBXW7-185aaUSP28竞争性地相互作用并释放”FBXW7α以降解c-Myc(注意:关联重要转录因子Myc)



5   circ-FBXW7FBXW-185aa的临床意义

    在38对组织中,胶质母细胞瘤组织中circ-FBXW7表达与配对的相邻非癌组织相比较低。同时,与低circ-FBXW7表达的患者相比,具有更高表达的胶质母细胞瘤患者(38名患者中的8名,21.1%)具有增加的总存活时间。与对照细胞相比,稳定过表达U251U373细胞的circ-FBXW7表现出低得多的致肿瘤性。此外,稳定过表达U251U373细胞植入小鼠的circ-FBXW7比对照小鼠寿命更长(每组5只小鼠)。



讨 论

    该研究仅限于培养细胞和异种移植动物模型。circ-FBXW7FBXW7-185aa的临床意义也可能需要通过更多实验得到解决。此外,虽然肿瘤抑制作用是确定的,但FBXW7-185aa的临床应用还有很长的路要走。

    

    上海生因生物专业提供基因组测序、微生物测序、转录组测序(RNAseq),高通量测序数据标准分析、个性化分析,各类图表绘制,及GEOTCGA数据挖掘服务。有需要的联系我们。


关注公众号回复数字 “1811061” 下载文献原文及译文



其他相关文献解读

返回上一步
打印此页
  • 上一个:     

    地址:上海市浦东新区南汇新城镇环湖西二路888号   电话:400-966-5216   QQ:2029432384

在线咨询
咨询QQ咨询QQ
咨询电话:
400-966-5216

请扫描二维码添加客服微信

公众号

[向上]
网易彩票-Welcome 河南快三-HOME 安徽彩票-Welcome 分分十一选五-Welcome 安徽11选5-官方推荐 新疆11选5-北京体彩网